إليسا
إنه اختبار مهم
يتم إجراؤه على طبق والفكرة هي إضافة الأجسام المضادة الموصوفة بالإنزيم إلى المستضدات وغسلها
[+] إذا كان تفاعل الجسم المضاد – المستضد مرتبطًا ، فلن يؤثر الغسيل على الارتباط وسيظل مرتبطًا
الخطوة الثانية هي إضافة ركيزة يعمل عليها الإنزيم ويغير لونها
[+] ترتبط الأجسام المضادة الموصوفة بالإنزيم بالمستضد ، لذلك يكون الإنزيم موجودًا. يتغير لونه بعد إضافة الركيزة
[_] مضاد-
ببساطة ، إذا كان الإنزيم موجودًا ، فسيعمل على المادة المتفاعلة ويغير لونها إذا لم يحدث أي تغيير
يلا بكون هل يوجد الانظم ثابت؟
بالنسبة لأولئك الذين لديهم تفاعل بين المستضدات والأجسام المضادة ، لذلك فإن مادة الغسيل لن تكون قادرة على تفتيتها والتخلص منها
وظيفة مادة الغسيل هي إزالة جميع المستضدات والأجسام المضادة إذا لم تكن ملزمة
كما قلنا في البداية ، فإن التفاعل بين المستضد واستجابة الجسم المضاد غير مرئي
الفكرة وراء اختبارات التلاعب هي أننا بحاجة إلى شيء مرئي لمعرفة ما إذا كان هناك تفاعل أم لا
هناك نوعان من إليسا
يعيش
لا مباشرة
اختبار ELISA المباشر:
تم الكشف عن المستضدات
متطلبات:
1- صفيحة مغلفة بمولد ضد يتم تحضيرها بطريقة معينة (يوضع المستضد المراد معرفته في صفيحة قاعدتها مسطحة).
2- الأجسام المضادة الموصوفة بالإنزيم (يتم تحضيرها)
جسم مضاد مرتبط بـ
إنزيم
3- الركيزة
4- مادة الغسيل
5-توقف المواد التفاعلية
طريقة اختبار:
تضاف الأجسام المضادة التي تحمل علامات الإنزيم إلى البليت المطلي بالمستضد وتترك لفترة من الوقت عند 25 درجة مئوية (الحضانة).
ثم يتم الغسل بمنظف للتخلص من الأشياء غير ذات الصلة والاحتفاظ بالأشياء المرفقة
يجف جيدا بعد الغسيل
ثم يتم إضافة الركيزة لفترة زمنية معينة
الخطوة الأخيرة هي إضافة نقطة لإيقاف التفاعل (بحيث لا يستمر التفاعل ويغير اللون أكثر من اللازم ويعطي نتيجة خاطئة)
لرؤية النتيجة + أو –
هذا ممكن بالعين المجردة ، لأن اللون يتغير في العينات الإيجابية (بسبب حدوث تفاعل بين الإنزيم ومادة التفاعل). بينما لا يتغير اللون في العينات السلبية
اعرف كمية عيار المستضد
يتم وضع اللوحة في قارئ يقرأ الطول الموجي للألوان ويعطي الأرقام المحسوبة بطريقة معينة
اختبار ELISA المباشر
يمكنه اكتشاف الأجسام المضادة
المتطلبات
1- صفيحة مغطاة بمولد مضاد معروف (يوضع المستضد المعروف على وسادة مسطحة)
2- عينات الدم المراد فحصها (لمعرفة ما إذا كانت تحتوي على أجسام مضادة أم لا)
2- الأجسام المضادة الموصوفة بالإنزيم (يتم تحضيرها)
جسم مضاد مرتبط بـ
إنزيم
3- الركيزة
4- مادة الغسيل
5-توقف المواد التفاعلية
طريقة اختبار:
1- تضاف عينات الدم المراد فحصها إلى منصة نقالة مغطاة بمولد مضاد معروف وتترك لفترة زمنية محددة عند درجة حرارة حضانة 25 م
2- ثم اغسله بالغسيل (حيث يتم إزالة الأجسام المضادة والمستضدات غير المقيدة) وجفف جيداً.
3- تضاف الأجسام المضادة التي تحمل علامة الإنزيم إلى البليت المغطاة بالمستضد وتترك لفترة معينة عند 25 درجة مئوية (الحضانة).
4- بعد ذلك يتم الغسل بالمنظف للتخلص من الاشياء غير ذات الصلة والاحتفاظ بالأشياء المتعلقة بها
يجف جيدا بعد الغسيل
5- ثم يتم إضافة الركيزة لفترة معينة
6- الخطوة الأخيرة هي إضافة نقطة لإيقاف التفاعل (بحيث لا يستمر في التفاعل وتغيير اللون أكثر من اللازم وإعطاء نتيجة سيئة)
لرؤية النتيجة + أو –
يمكن رؤيته بالعين المجردة حيث يتغير اللون في العينات السلبية
بعد إضافة الأجسام المضادة إلى المستضدات وعدم تكوين ارتباط ، هذا يعني أن أولئك الذين يغسلون سيتعين عليهم التخلص من الأجسام المضادة غير المرتبطة
عندما تأتي لإضافة أجسام مضادة مكتوب عليها إنزيم خاص بذلك المستضد ، فإنها ستلتصق به ، وعندما نقوم بالغسيل ، لن يخرجوا مع مادة الغسيل لأنها مرتبطة.
لمن نأتي إلينا لإضافة مادة التفاعل تجدون عليها إنزيم يعمل عليها ويغير لونها
لرؤية النتيجة + أو –
يمكن رؤيته بالعين المجردة لأن اللون لا يتغير في العينات الإيجابية
بمجرد إضافة الأجسام المضادة إلى المستضدين ويتم الارتباط ، هذا يعني أن أولئك الذين يغسلون لا يتخلصون من الأجسام المضادة لأنها مرتبطة
أولئك الذين يأتون لإضافة الأجسام المضادة التي تحمل علامات الإنزيم إلى هذا المستضد لن يرتبطوا بي لأنه مرتبط
بالنسبة لأولئك الذين يغسلون ، سيخرج مع منظف لأنه غير متصل
بالنسبة لمن يأتون لإضافة مادة التفاعل فلن تجد الإنزيم يعمل عليها ويغير لونها
: بعد وقفة طويلة نأخذ البليد للقراءة
إليسا التنافسية
لأن الأجسام المضادة التي تحمل علامة الإنزيم والأجسام المضادة (الموجودة في عينات المصل) المراد اختبارها تتنافس على الارتباط بمولد الضد.
إذا كانت المعلمة مرتبطة بإنزيم ، فإن اللون سيتغير لأنه يتفاعل مع مادة التفاعل ، وبالتالي تكون النتيجة سلبية ، مما يعني عدم وجود أجسام مضادة للمستضد المحدد في المصل
وإذا كانت الأجسام المضادة المختبرة مرتبطة بالمستضدات ، أي مع الأجسام المضادة التي تحمل علامات الإنزيم ، فلن تجد طريقة للارتباط بالمستضدات وسيتم التخلص منها بعد الغسيل ، وبالتالي لن يتغير اللون.